Тропонин — это белок, содержащийся в скелетных и сердечных мышечных волокнах, который регулирует мышечное сокращение. Сердечные тропонины I и T специфичны для сердца и используются в качестве диагностических биомаркеров для выявления повреждений сердца. Уровень тропонина в крови повышается при повреждении сердечной мышцы, например, во время сердечного приступа. Высокочувствительные анализы на тропонин могут обнаруживать очень низкие уровни тропонина в крови и используются для быстрой диагностики сердечных приступов.
Цвет пробирки, используемой для сбора образцов крови для высокочувствительных анализов на тропонин I (hs-cTnI), может повлиять на результаты теста. Большинство больниц и лабораторий рекомендуют использовать пробирки с золотым или золотисто-черным верхом, содержащие активатор свертывания и гелевый сепаратор для тестирования hs-cTnI. Пробирки с золотым верхом помогают полностью отделить сыворотку от клеток крови через гелевый барьер. Это обеспечивает самый чистый образец сыворотки для анализа очень низких уровней тропонина, обнаруженных с помощью высокочувствительных анализов. Другие добавки в пробирках, такие как гепарин или ЭДТА в зеленых или фиолетовых верхних пробирках, могут мешать высокочувствительным иммуноферментным анализам на антитела к тропонину. Для получения точных результатов hs-cTnI требуются специально разработанные пробирки с золотым верхом.
Тропонин играет жизненно важную роль в сокращении поперечно-полосатых мышц. Он состоит из трех регуляторных белков — тропонина C, тропонина I и тропонина T, — которые связаны с тропомиозином на тонких мышечных нитях. В ответ на сигналы ионов кальция конформационные изменения тропонина изменяют позиционирование тропомиозина, разблокируя сайты связывания актина и миозина и инициируя мышечное сокращение посредством АТФ-зависимого цикла перекрестных мостиков. Тропонин I ингибирует взаимодействие актина и миозина при низком уровне кальция, тогда как тропонин C содержит участки связывания кальция для восприятия внутриклеточных колебаний кальция, которые вызывают сокращение. Тропонин T прикрепляет комплекс тропонина к тропомиозину на тонкой нити.
Хотя все три субъединицы тропонина обнаружены в скелетных мышцах, изоформы сердечного тропонина I и T уникальны для сердечной мышцы. После повреждения миокарда, например, во время инфаркта миокарда, некроз кардиомиоцитов высвобождает cTnI и cTnT в кровоток. Обнаружение повышенного сердечного тропонина в крови обеспечивает очень специфичный и чувствительный биомаркер повреждения миокарда.
Стандартные анализы тропонина могут обнаруживать уровни выше 99-го процентиля у здоровых пациентов, что составляет приблизительно 0,04 нг/мл для cTnI. Однако даже незначительные повышения тропонина ниже этого порогового значения указывают на миокардиальный стресс и повреждение. Высокочувствительные анализы тропонина используют передовую технологию антител для улучшения нижнего предела обнаружения в 10–100 раз по сравнению со стандартными анализами.
Уровни cTnI у здоровых людей обычно не обнаруживаются анализами hs-cTnI. Обнаруживаемые концентрации выше специфичного для анализа 99-го процентиля референтного предела сигнализируют о том, что произошло повреждение миокарда. Это позволяет быстро диагностировать инфаркт миокарда у пациентов с болью в груди или другими симптомами, указывающими на острый коронарный синдром. Высокочувствительное тестирование тропонина также помогает в стратификации риска и предоставляет прогностическую информацию для пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями.
Поскольку анализы hs-cTnI могут обнаруживать тропонин при очень низких концентрациях пикограмм/мл или нанограмм/мл, используемая пробирка для сбора крови имеет решающее значение. Загрязнение образца и нестабильность комплекса тропонина могут отрицательно повлиять на результаты теста, если используются неподходящие пробирки.
Для тестирования hs-cTnI большинство лабораторий рекомендуют использовать пробирки для разделения сыворотки с золотым верхом или крапчатым золотисто-черным верхом. Эти пробирки содержат активаторы свертывания, как правило, частицы кремния, для ускорения образования сгустка. Они также содержат барьер из гелевого сепаратора, который изолирует сыворотку от свернувшихся клеток крови после центрифугирования. Гель образует физический барьер, предотвращающий загрязнение слоя сыворотки фрагментами эритроцитов, тромбоцитов или фибрина, в котором будут измеряться уровни hs-cTnI.
| Добавка в пробирку | Цвет пробирки |
|---|---|
| Активатор свертывания и гелевый сепаратор | Золотой верх |
| Активатор свертывания, частицы кремния, гелевый сепаратор | Крапельный золотисто-черный верх |
Это обеспечивает образец сыворотки высочайшего качества для чувствительного анализа тропонина. Другие типы пробирок без геля могут не полностью отделить сыворотку от клеток крови. Следовые количества клеточных компонентов в сыворотке могут помешать реакциям антител иммуноферментного анализа, используемым для измерения уровней тропонина. Гелевый барьер обеспечивает более чистую, бесклеточную сыворотку для обнаружения cTnI.
Определенные химические вещества, присутствующие в пробирках для сбора крови, также могут нарушить анализ hs-cTnI, если они секвестрируют или денатурируют тропонин. Пробирки с жидкими антикоагулянтами литий-гепарином или натрий-гепарином обычно имеют зеленые или светло-зеленые верхушки. Эти соли гепарина связывают белки, такие как тропонин, не давая им должным образом взаимодействовать с антителами для обнаружения, используемыми в иммуноанализах. Отрицательно заряженные молекулы гепарина могут дополнительно мешать связыванию антигена антитела посредством электростатических взаимодействий. Использование пробирок с литием или натрием-гепарином не рекомендуется для тестирования hs-cTnI.
Пробирки с ЭДТА с лавандовыми верхушками, которые содержат соль этилендиаминтетрауксусной кислоты в качестве антикоагулянта, могут аналогичным образом мешать анализу тропонина. ЭДТА хелатирует ионы металлов, такие как кальций и магний, которые являются важными кофакторами для функционирования многих иммуноферментных антител и ферментов. Хелатирование металлов может снизить точность обнаружения тропонина. Также следует избегать использования пробирок с ЭДТА с лавандовым верхом для высокочувствительного анализа тропонина.
| Добавка в пробирку | Цвет пробирки |
|---|---|
| Жидкий антикоагулянт литий-гепарин | Светло-зеленый верх |
| Гепарин натрия | Зеленый верх |
| Антикоагулянт ЭДТА | Лавандовый верх |
Плазма из этих пробирок может содержать вещества, которые мешают связыванию антител или структуре тропонина. Это может снизить точность обнаружения очень низких концентраций тропонина, присутствующих у здоровых пациентов, с использованием высокочувствительных анализов.
Пробирки с золотым или золотисто-черным верхом, специально разработанные для разделения сыворотки, являются наилучшим вариантом для сбора крови для анализа hs-cTnI. Гель эффективно разделяет сыворотку от клеточных компонентов крови после центрифугирования. Это удаляет источники загрязнения, такие как липиды, белки, цитозольное содержимое и твердые частицы из поврежденных клеток крови, которые могут повлиять на результаты анализа тропонина.
Точный состав разделительного геля различается у разных производителей пробирок. Но большинство из них содержат тиксотропный гель, изготовленный из специально разработанного силикона. Этот нерастворимый в воде гель имеет плотность между плотностью клеток крови и сыворотки. При центрифугировании он мигрирует, образуя отчетливый барьерный слой между сывороткой и клеточными фракциями. Гель также может быть оптимизирован для минимальной химической реакции с компонентами анализа, чтобы избежать каких-либо помех в методике.
В целом, пробирки для разделения сыворотки с золотым верхом обеспечивают самый чистый образец сыворотки с наименьшим количеством мешающих веществ. Это позволяет наиболее точно измерять очень низкие уровни тропонина с использованием высокочувствительных методов иммуноанализа. Пробирки с золотым стандартом специально разработаны для обеспечения оптимальной целостности образца для тестирования hs-cTnI.
Помимо использования надлежащих типов пробирок, необходимо уделять внимание процедурам обработки образцов. После того, как кровь собрана в пробирки с золотым верхом для анализа hs-cTnI, пробирки следует осторожно перевернуть 5-10 раз, чтобы распределить активаторы свертывания. Затем пробирки следует транспортировать вертикально и центрифугировать в течение 10-15 минут при 1100-1300xg в течение 2 часов после сбора. После центрифугирования сыворотку следует перенести в пластиковую транспортную пробирку для анализа или охладить при температуре 2–8 °C до 24 часов. Если сыворотку невозможно проанализировать в течение 24 часов, ее следует хранить замороженной при температуре -70 °C и избегать циклов замораживания-оттаивания. При осторожном обращении с использованием золотых сепараторных пробирок гемолизированные, липемические или иктеричные образцы не должны представлять проблемы для анализа.
Подводя итог, следует отметить, что золотые или золото/черные верхние сепараторные пробирки для сыворотки, содержащие активаторы свертывания и гелевый барьер, настоятельно рекомендуются для сбора образцов крови для высокочувствительного тестирования тропонина. Пробирки специально разработаны для получения бесклеточной сыворотки с минимальным количеством мешающих веществ, которые могут повлиять на обнаружение очень низкого тропонина с помощью иммуноанализа. Зеленые, фиолетовые или другие типы пробирок могут изолировать или изменять тропонин таким образом, что это снижает точность анализа. При правильном обращении пробирки-сепараторы золотого стандарта позволяют получить чистый образец сыворотки, оптимальный для точного измерения hs-cTnI с целью быстрой диагностики инфаркта миокарда.